Polüakrüülamiidgeeli elektroforeesi ettevaatusabinõud

· polüakrüülamiidgeel peab koos akrüülamiidmonomeeri, polümerisatsiooni lähteaine, katalüsaatori ning soola ja puhverseguga koos.

· akrüülamiidja BIS (N,N'-metüleen topeltakrüülamiid) on monomeeri geelmaatriks.

· ammooniumpersulfaat käivitab liimi polümerisatsiooniprotsessi. Liimi valmistamiseks on vaja 10% ammooniumpersulfaadi lahust, mis on valmistatud vees. Enamik teabest viitas aktiivse kasutamise vajadusele. Kuid 10% lahust võib hoida 4 ℃ juures mitu nädalat ilma olulise aktiivsuse vähenemiseta. Täiendage 10 ml-ni ja visake ära, kui liim ei kleepu.

Näpunäide: protsentakrüülamiidsekveneerimisel ei ole liim ja valguliim sama. Kui kasutate eelnevalt valmistatud akrüülamiidi: BIS-lahust, veenduge, et hankite õige pudeli.

· TEMED (N, N, N ', N '- tetrametüületüleendiamiin) on katalüsaator, pruunis pudelis, mis asetatakse külmikusse. Lisa vahetult enne liimi valamist.

· polüakrüülamiidelektroforees elektroforeesis kasutatud klaasi tuleb iga kord enne ja pärast pesta. Pärast elektroforeesi peske pehme harja ja lapiga kuumas seebivees, loputage destilleeritud veega ja laske kuivada.

· õõnespolümeeriga võib tekkida niiskus ja tolm. Enne elektroforeesi puhastage klaasplaat klaasipuhastusvahendiga ja pühkige seda pehme harjaga. Peske destilleeritud veega ja kuivatage hoolikalt paberlapiga. 70% etanooliga loputamine enne paberiga pühkimist aitab puhastada ja kiirendab kuivamist. Lisage järjestikku akrüülamiidi proovid: BIS, vesi, puhverlahus, ammooniumpersulfaat, TEMED. Loksutage korralikult ja valage kohe.

Polüakrüülamiidi ei ole vaja enne polümerisatsiooni degaseerida. (Varem pandi akrüülamiid mullide eemaldamiseks vaakumisse, kuna hapnik pärsib polümerisatsiooni.)

Horisontaalsed liimimispunkti näidisotsad.

· asetage alumisse kasti musta paberitükk, must taust, et teha mõni näidisava, et paremini näha.
· liimipaagiga täidetud puhver, vahetult kolloidi kohal.
· kui serval on tuli, lülitage tuled sisse, laske valgusel kolloidselt paista. Tõmmake proov pipetti.
· automaatse pipeteerimisseadme kasutamine.
· 10-200 mu puhul saab enamikus proovi punktides kasutada 1 vedeliku liikumispunkti. Väga väikeste prooviaukude jaoks (alla 10μ1) on liimi järjestamiseks kasutatav pikk pipetipea mugavam.

· lihtsalt proovi sisse kastetud pipeteerimine, aeglaselt liikuva vedeliku sissehingamine. Proov võib tunduda glütseriiniga kleepuv ja kiire pumpamine võib tõmmata pipetipeasse õhumulle.

· proovid pärast pipetipea sissehingamist liigutavad vedelikupead õrnalt toru serval või pühkimispaber imeb vedelikupea tilkadest väljapoole. Olge ettevaatlik, et proovi ei imetaks.

Asetage proov prooviavasse

· pipeteerimisseade, et hoida väikest survet, panna proovid kergelt liigutama ülevoolu vedelikupead.
· puhvrisse sisestatud pipetipea, mis on täpiavadest veidi kõrgemal, säilitab positiivse rõhu. Pipeti otsa saab pista väikesesse auku.
· aeglaselt ja ühtlaselt proovid välja. Pipeti ots asetatakse punktproovi ava kohale ja proov vajub auku. Laske proovil sisselükkamise asemel vajuda, et see prooviava täidaks.
· pärast viimast vedelikupeaga proovi tilka liigub vedelik teisele jalale, tõstab aeglaselt vedeliku liikumist, liigub puhvrist välja

Kuidas vertikaalset liimiproovi võtta?

· kahe klaasitüki vahele moodustatud vertikaalsed liimimispunkti prooviaugud. Väga õhukese liimi puhul ei saa pipetipead isegi kahe klaasplaadi vahele pista. Vaata glütseriini! Asetage pipetipea prooviaugu kohale ja proov vajub auku.
· punkti proovi enne, kindlasti panna vertikaalne punkt polüpropüleen atsüül geel proovi auku loputatakse puhtaks. Peske ära polümeriseerimata akrüülamiid ja vesi, mis võib prooviaugu põhja ilmuda. Vesi võib prooviaugu oluliselt väiksemaks muuta. Kasutage 25 ml või 50 ml süstalt ja 18 G nõela. Valage elektroforeesipuhver ja loputage prooviava ettevaatlikult.
· prooviava võib olla raske näha, kuid samas on ülejäänu lihtne. Kui auke on liiga palju, võib proovipuhvrit testida bromofenoolsinisega.