Polüakrüülamiidgeelelektroforeesi ettevaatusabinõud

· polüakrüülamiidgeel peab koosnema akrüülamiidi monomeerist, polümerisatsiooni lähteainest, katalüsaatorist ning soola ja puhverlahuse segust.

· akrüülamiidja BIS (N, N'-metüleen-topelt-akrüülamiid) on geelmaatriksi monomeer.

· ammooniumpersulfaat käivitab liimi polümerisatsiooniprotsessi. Liimi valmistamiseks on vaja 10% ammooniumpersulfaadi lahust vees. Enamik teabest viitab vajadusele aktiivset kasutamist. 10% lahust võib aga hoida temperatuuril 4 ℃ mitu nädalat ilma olulise aktiivsuse vähenemiseta. Lahus tuleb täita 10 ml-ni ja visata ära, kui liim ei kleepu enam kokku.

Näpunäide: protsentakrüülamiidSekvenseerimisel ei ole liim ja valguliim sama asi. Kui kasutate eelnevalt valmistatud akrüülamiidi:BIS-lahust, veenduge, et saate õige pudeli.

· TEMED (N, N, N', N'- tetrametüületüleendiamiin) on katalüsaator, mis on pruunis pudelis ja asetatakse külmkappi. Lisatakse vahetult enne liimi valamist.

· Polüakrüülamiidi elektroforeesis kasutatav klaas tuleks enne ja pärast iga kasutuskorda pesta. Pärast elektroforeesi peske klaas pehme harja ja lapiga kuumas seebivees, loputage destilleeritud veega ja laske kuivada.

· Niiskus ja tolm võivad õõnespolümeeriga kokku puutuda. Enne elektroforeesi puhastage klaasplaat klaasipuhastusvahendiga ja pühkige pehme harjaga. Peske destilleeritud veega ja kuivatage hoolikalt paberrätikuga. Loputamine 70% etanooliga enne paberiga pühkimist aitab puhastada ja kiirendada kuivamist. Lisage akrüülamiidi proovid järjestikku: BIS, vesi, puhverlahus, ammooniumperoksülsulfaat, TEMED. Loksutage hoolikalt ja valage kohe.

Polüakrüülamiidi degaseerimine enne polümerisatsiooni ei ole vajalik. (Akrüülamiidi paigutati mullide eemaldamiseks vaakumisse, kuna hapnik pärsib polümerisatsiooni.)

Horisontaalsete liimipunktide näidisotsad.

· Pane alumisse kasti musta paberi tükk, musta taustaga, et teha näidisauk, et paremini näha.
· liimipaagiga täidetud puhver, veidi kolloidi kohal.
· Kui serval on tuli, lülitage tuled sisse ja laske kolloidsel valgusel paista. Tõmmake proov pipetti.
· automaatse pipeteerimisseadme kasutamine.
· 10–200 μM puhul saab proovi enamikus punktides kasutada ühte vedeliku liikumispunkti. Väga väikeste prooviavade (alla 10 μM) puhul on mugavam kasutada liimi sekveneerimiseks kasutatavat pikka pipetipead.

· pipeteerimine proovis olles, aeglaselt liikuva vedeliku sissehingamine. Proov võib tunduda glütseriiniga kleepuv ja kiire pumpamine võib pipetipeasse õhumulle tõmmata.

· Pärast pipeteerimispea sissehingamist liigutage proovi vedelikupead õrnalt toru serval või pühkige paberit, imedes vedelikupea tilkade alt välja. Olge ettevaatlik, et proovi ei imetaks.

Asetage proov prooviavasse

· Pipeteerimisseade hoiab väikest rõhku, et proovid veidi ülevooluvedeliku pead liigutaksid.
· pipeteerimispea on puhvrisse sisestatud, veidi kõrgemal kui punktaugud, et säilitada positiivne rõhk. Pipeti otsa saab sisestada väikesesse auku.
· Tõmmake proovid aeglaselt ja ühtlaselt välja. Pipeti ots asetatakse prooviava kohale ja proov vajub auku. Laske proovil vajuda, et prooviava täita, selle asemel, et sisse suruda.
· Kui viimane tilk proovi vedelikupeaga on jõudnud, liigub vedelik teise jala juurde, tõstke vedeliku liikumist aeglaselt ja liikuge puhvrist välja

Kuidas teha vertikaalset liimiproovide võtmist?

· kahe klaasitüki vahele moodustuvad vertikaalsed liimipunkti prooviaugud. Väga õhukese liimikihi korral ei saa pipetipead isegi kahe klaasplaadi vahele sisestada. Jälgige glütseriini! Pange pipetipea prooviaugu kohale ja proov vajub auku.
· Enne proovi asetamist veenduge, et polüpropüleenist atsüülgeeli vertikaalne ots oleks prooviaugus, mis loputatakse puhtaks. Peske ära polümeriseerumata akrüülamiid ja vesi, mis võivad prooviaugu põhja ilmuda. Vesi võib prooviaugu oluliselt vähendada. Kasutage 25 ml või 50 ml süstalt ja 18-kaliibrilist nõela. Valage sisse elektroforeesipuhver ja loputage prooviauguga ettevaatlikult.
· prooviava nägemist võib olla raske näha, aga samal ajal on ülejäänu lihtne. Kui auke on liiga palju, saab proovipuhvrit testida bromofenoolsinisega.